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ELISA檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)有必要恪守哪3個(gè)中心原理
更新時(shí)間:2019-09-23   點(diǎn)擊次數(shù):1130次

  ELISA檢測(cè)試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性,酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性,又保留酶的活性。
 
   ELISA檢測(cè)試劑盒可以用于:(1)檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等;(2)具有快速、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。
 

   ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)中的血清需采用血管收集血液,室溫血液自然凝固30分鐘,1000xg離心15分鐘左右,收集上清,分裝后,標(biāo)好號(hào),-20°C或-80°C保存。運(yùn)輸是用干冰。
 
   把ELISA檢測(cè)試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。對(duì)于一個(gè)旨在分離CD4陽(yáng)性T的試劑盒來(lái)說(shuō),操作流程主要有以下幾步。首先,將樣品與anti-CD4抗體包被的磁珠共同孵育,使抗體與CD4+T結(jié)合。然后洗去不需要的非目標(biāo)(即不表達(dá)CD4的),留下磁珠-抗體-復(fù)合物。將上述復(fù)合物與能結(jié)合anti-CD4抗體的二抗一起孵育胞,形成磁珠-抗體-二抗復(fù)合物。我們可以用磁鐵去除這種磁珠-抗體-二抗復(fù)合物,而所有的CD4+細(xì)胞留在上清中。zui后,只需將上清轉(zhuǎn)移就可以進(jìn)行下游研究了。
 
  ELISA檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)有必要恪守以下3個(gè)中心原理:
 
 (1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面,并堅(jiān)持其免疫學(xué)活性;
 
 (2)抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶銜接構(gòu)成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能堅(jiān)持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
 
 (3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可依據(jù)參加底物的色彩反響來(lái)斷定是否有免疫反響的存在,并且色彩反響的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,ELISA檢測(cè)試劑盒可依據(jù)已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺制作規(guī)范曲線并依此計(jì)算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。
 
  ELISA檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè)注意事項(xiàng)
 
1.從2-8℃取出的試劑盒,在開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
 
2.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差
 
3.建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測(cè)。
 
4.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
 
5.為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。
 
6.不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7.底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。
 
   

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