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今天為大家講述晶抗生物牛ELISA試劑盒的基本操作步驟如下

準(zhǔn)備工作：

試劑準(zhǔn)備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，室溫（20-25℃）放置 30 分鐘左右，讓試劑恢復(fù)到室溫。同時(shí)按照說(shuō)明書(shū)的要求準(zhǔn)備好各種試劑，如洗滌液可能需要進(jìn)行稀釋等。

樣本準(zhǔn)備：采集的牛血清、血漿或其他相關(guān)液體樣本，按照規(guī)定的方法進(jìn)行處理和保存。例如，血清樣本可于室溫放置 2 小時(shí)或 4℃過(guò)夜后于 1000xg 離心 20 分鐘，取上清液用于檢測(cè)；血漿樣本可用 EDTA 或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后 30 分鐘內(nèi)于 2-8℃、1000xg 離心 15 分鐘，取上清液備用。

加樣：

分組：取出 96 孔板，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（一般有 6 個(gè)濃度梯度）、空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑）、待測(cè)樣品組。為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性，建議設(shè)置復(fù)孔。

加樣操作：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入適量的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中，空白對(duì)照孔加入等量的蒸餾水或相應(yīng)的空白對(duì)照液，其余微孔中加入處理好的待測(cè)樣本。加樣時(shí)應(yīng)將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

溫育：

用封板膜封板后，將酶標(biāo)板放入濕盒內(nèi)，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)的要求在特定溫度（通常為 37℃）下恒溫孵育一定的時(shí)間（一般為 1 小時(shí)左右，但不同的試劑盒可能有不同的要求）。在溫育過(guò)程中，要確保溫度的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，避免溫度波動(dòng)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。

洗滌：

小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干。每孔加滿洗滌液，靜置 15-30 秒后棄去，如此重復(fù)多次（一般為 5 次），最后用吸水紙拍干。洗滌過(guò)程要充分，以確保去除未結(jié)合的物質(zhì)，避免對(duì)后續(xù)的檢測(cè)產(chǎn)生干擾，但也要注意避免過(guò)度洗滌導(dǎo)致樣本損失。

加酶標(biāo)溶液：

除空白對(duì)照孔外，向標(biāo)準(zhǔn)品組和待測(cè)樣本組的各孔中加入適量的酶標(biāo)溶液。加酶標(biāo)溶液時(shí)要注意操作的準(zhǔn)確性，避免加樣誤差。

再次溫育：同第 3 步的溫育操作，再次進(jìn)行溫育，使酶標(biāo)溶液與樣品充分反應(yīng)。

顯色：

各孔加入顯色劑 A 液，再加入顯色劑 B 液，輕輕震蕩混勻。然后在特定溫度（如 25-37℃）下避光反應(yīng)一定時(shí)間（一般為 10-15 分鐘），此時(shí)孔內(nèi)的顏色會(huì)發(fā)生變化。

終止反應(yīng)：

加入終止液，終止反應(yīng)（此時(shí)顏色通常會(huì)由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。終止液的加入量要準(zhǔn)確，并且要迅速、均勻地加入，以確保反應(yīng)能夠及時(shí)終止。

讀板：使用酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)（一般為 450nm）下讀取各孔的吸光度（OD 值）。

結(jié)果分析：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的 OD 值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)待測(cè)樣品的 OD 值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)（如果在加樣前對(duì)樣品進(jìn)行了稀釋），即為樣品的實(shí)際濃度。

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